因此,一般的建议步骤是活化羧基使用pH=5-6的MES缓冲液,之后使用PBS缓冲液调节pH=7.2-7.5完成后的偶联反应。
与EDC/NHS类似的是,DNA 固定方法,也可以使用将两个含有氨基的分子连接到一起。比如,先在纳米粒子外包一层二氧化硅,通过APTES等试剂引入氨基,之后通过将氨基修饰的纳米晶和蛋白质的氨基偶联到一起。
实际操作时需要注意的是,DNA的固定方法,虽然共价偶联的方法优于物理吸附,但基于氨基和羧基的抗体固定方法仍具有一定程度的随机性,有时在Fab区(用于结合抗原)存在易于修饰的氨基/羧基,在与固体表面偶联后会造成抗体的失活。在抗体领域,抗体与的偶联同样存在上面所说的问题(由于抗体表面可能存在很多可修饰的氨基酸,不能确定连在哪个部位
该方法的主要优点是可以用很少的步骤合成极其大量的探针阵列。例如,合成 48 ( 65536 ) 个探针的 8 聚体寡核苷酸序列仅需 4 × 8=32 步操作, 8 小时就可以完成。而如果用传统方法合成然后点样,那么工作量的巨大将是不可思议的。同时,上海DNA固定,用该方法合成的探针阵列密度可高达到 106/cm2 。不过,尽管该方法看来比较简单,实际上并非如此。
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