共价偶联比物理吸附更先进一些，主要表现在它克服了物理吸附的两个缺点：共价偶联在固体表面的抗体（1）排列取向一定程度上是确定的；（2）不容易脱离到溶液中。赖氨酸、谷氨酸和天冬氨酸等氨基酸经常被作为蛋白质修饰的靶点，ITO玻璃表面氨基修饰，其中赖氨酸尤甚（Chem. Sci.， 2017，8， 63-77，Chem. Sci.， 2018， 9， 79–87），广西表面氨基修饰，其它氨基酸由于位于蛋白质内部或反应性弱或不可控等原因而很少用于偶联。
2.APES(3-氨丙基-乙氧基)
APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片，否则，组织片中易出现气泡。 APES的使用方法:用50倍稀释(APESl份、49份混合)，将洗净的玻片放人稀释好的APES中，停留20~30秒，取出稍停，再人纯或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位.并尽量减少气泡存在，以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱混合使用。
感受完这种粗糙度之后，表面氨基修饰的处理方法，2010年就有人把疏水蛋白引入到检测中，改善这种基质表面抗体堆积不均匀的情况。疏水蛋白能够自组装形成10nm厚的两亲性膜，疏水性一侧贴在疏水性的聚板上，亲水性的一侧伸向溶液中，可以物理吸附抗体，用于组装一抗。石英晶体微天平结果显示在pH=5时，聚板上形成一层致密的膜；X射线光电子能谱和水接触角测试显示疏水蛋白修饰后，疏水的聚板能够保持长达3个月的亲水性；原子力显微镜结果显示，连接到疏水蛋白上的抗体也终于站起来了，是一种“end-on”的取向排列。
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