基因芯片技术由于同时将大量探针固定于支持物上,表面氨基化方法,所以可以一次性对样品大量序列进行检测和分析,从而解决了传统核酸印迹杂交(Southern Blotting 和 Northern Blotting 等)技术操作繁杂、自动化程度低、操作序列数量少、检测效率低等不足。而且,通过设计不同的探针阵列、使用特定的分析方法可使该技术具有多种不同的应用价值,表面氨基化的意义,如基因表达谱测定、实变检测、多态性分析、基因组文库作图及杂交测序等。
使用广泛的氨基和羧基偶联剂就要数EDC和NHS(Sulfo-NHS)了。大多数情况下,同时使用EDC/NHS的交联于只使用EDC的,NHS的使用能够极大增强偶联效率。但也有个例,比如2012年的一篇工作(Diagnostics (basel). 2012 Aug 27;2(3):23-33.),表面氨基化,他们在APETS修饰的金芯片和96孔板表面组装一抗,发现单独使用EDC比同时使用EDC/NHS和EDC/Sulfo-NHS都。
物理吸附是简单的抗体固定化方法,表面氨基化的方法,包括静电作用、疏水作用、极性相互作用等非共价键作用。优点显而易见—省时省力省钱,缺点也是不可避免—(1)抗体偶联的取向(orientation)不可控,完全由概率来确定;(2)物理吸附作用力弱,应用时有抗体脱离现象。学中,经常用到物理吸附的地方就是一抗的负载过程。比如在ELISA板(聚)和侧流试纸条(纤维素膜)等表面负载抗体的时候,用到的就是物理吸附作用。
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