EDC/NHS交联方法的使用已经非常成熟了,一般将纳米粒子表面用羧基或氨基功能化处理,之后偶联纳米粒子与抗体上的羧基或氨基,完成抗体的偶联。我们在Thermo Fisher上找到了一般的步骤和注意事项。EDC和Sulfo-NHS在pH 4.5-7.2的水溶液中活化羧基具有佳活性,但Sulfo-NHS活化后的分子与氨基的反应在pH 7-8的水溶液中才具有佳活性。
感受完这种粗糙度之后,2010年就有人把疏水蛋白引入到检测中,改善这种基质表面抗体堆积不均匀的情况。疏水蛋白能够自组装形成10nm厚的两亲性膜,如何表面羟基化,疏水性一侧贴在疏水性的聚板上,亲水性的一侧伸向溶液中,可以物理吸附抗体,表面羟基化方法,用于组装一抗。石英晶体微天平结果显示在pH=5时,聚板上形成一层致密的膜;X射线光电子能谱和水接触角测试显示疏水蛋白修饰后,疏水的聚板能够保持长达3个月的亲水性;原子力显微镜结果显示,表面羟基化条件,连接到疏水蛋白上的抗体也终于站起来了,是一种“end-on”的取向排列。
目前,由于灵敏度所限,多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增,不过也有不少人试图绕过这一问题,如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法,海南表面羟基化,引物特异性强,无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐; Lynx Therapeutics 公司引入的大规模并行固相法 (Massively parallel solid-phase cloning) ,可在一个样品中同时对数以万计的 DNA 片段进行,且无需单独处理和分离每个。
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